生物監(jiān)測(cè)實(shí)訓(xùn)周總結(jié)

生物監(jiān)測(cè)實(shí)訓(xùn)周總結(jié)

生態(tài)0931班

組員：鐘紅梅周曉琴鐘山張宇琛史華杰

測(cè)定項(xiàng)目：蠶豆根尖微核監(jiān)測(cè)技術(shù)測(cè)定時(shí)間：201*/12/２７－３１實(shí)驗(yàn)材料：蠶豆

實(shí)驗(yàn)儀器：顯微鏡、溫箱、恒溫水浴鍋、冰箱、手持計(jì)數(shù)器、鑷子、脫脂棉盤、解剖針、載玻片、蓋玻片、試劑瓶、青霉素空瓶、燒杯、吸水紙等。

所需溶液：卡偌液、席夫試劑、ＳＯ２洗滌液、洗滌劑４５％的醋酸溶液、。一、實(shí)驗(yàn)步驟；

１．侵種（12月２３日上午）

將蠶豆按需要放入盛有自來水的燒杯中。置２５℃溫箱內(nèi)，侵泡２６ｈ。

２、催芽（12月２４日上午）

待種子吸脹后，將其放入解剖盤中，在２５溫度下℃培養(yǎng)２４小時(shí)，待種子初生根２－３ｍｍ時(shí)，選發(fā)芽好的，放入脫脂棉的解剖盤中。在２５℃催芽４８小時(shí)，出生根長(zhǎng)至２－３ｃｍ時(shí)，進(jìn)行處理。３、處理根尖（12月２７日８：２０）

截取蠶豆的根尖，放入三個(gè)培養(yǎng)皿中，被測(cè)液的濃度分別是，讓被測(cè)液侵住根尖即可。用自來水作對(duì)照實(shí)驗(yàn)，處理時(shí)間為４ｈ．４、根尖細(xì)胞的恢復(fù)培養(yǎng)（12月２７日１２：２０）

將處理后的種子用自來水侵洗３次，每次２－３分鐘，然后把洗凈的種子放在濕脫脂棉盤中，恢復(fù)培養(yǎng)２２－２４ｈ。５、根尖細(xì)胞的固定（12月２８日１２：２0）

將恢復(fù)的種子，從根尖頂端切下１ｃｍ長(zhǎng)幼根放入青霉素空瓶中，加入卡洛液固定２４ｈ，置４℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩＃�、孚爾根染色�?2月２９日１２：２0）

１）固定好的幼根，在青霉素瓶中用蒸餾水侵洗三次，每次５ｍｉｎ．２）洗凈殘水，再加５ｍｏｌ／ｌＨＣＬ將幼根泡住，連瓶放入２８℃水浴鍋中水解幼根２５ｍｉｎ左右，只有跟被軟化為止。３）用蒸餾水侵洗幼根兩次，每次５ｍｉｎ。

４）在暗室或遮光的條件下加席夫試劑，染色１－４ｈ。５）除去染液，用ＳＯ２侵洗液清洗幼根２次，每次５ｍｉｎ。６）用蒸餾水侵洗１次，５ｍｉｎ。

７）將幼根放在新?lián)Q的蒸餾水中，置４℃的冰箱內(nèi)保存，可供隨時(shí)裝片之用。

7、制片（12月３０日８：００）

１）將幼根放在干凈的載玻片上，用解剖針截下１ｍｍ左右的根尖。２）滴上少許４５％的醋酸溶液，用解剖針將根尖搗脆。３）蓋上蓋玻片，注意不要有氣泡。４）再在蓋玻片上加一小塊濾紙。８、鏡檢及微核識(shí)別標(biāo)準(zhǔn)將制好的片子放在顯微鏡下觀察，先用低倍鏡找到分生細(xì)胞區(qū)細(xì)胞分散均勻、膨大、分裂較多的部位，再轉(zhuǎn)高倍鏡觀察。

每一處理觀察２個(gè)根尖。記錄細(xì)胞數(shù)。二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

蠶豆根尖微核監(jiān)測(cè)記錄表

對(duì)照組序號(hào)１２處理組２處理組１１２１２三、計(jì)算

ＭＣＮ‰＝某測(cè)試樣點(diǎn)（或?qū)φ眨┯^察到的ＭＣＮ數(shù)／某測(cè)試樣點(diǎn)（或?qū)φ眨┯^察到的細(xì)胞數(shù)×１０００‰對(duì)照組：

１、ＭＣＮ‰＝２／１０７３×１０００‰＝１．８６‰２、ＭＣＮ‰＝２／１１３６×１０００‰＝１．７６‰

微核數(shù)２２３２５６觀察的細(xì)胞數(shù)１０７３１１３６１８１１１０１２１３５３１２４６均值＝１．８６‰＋１．７６‰／２＝１．８１‰處理組：

１、ＭＣＮ‰＝３／１８１１×１０００ＭＣＮ‰＝１．６６‰2、ＭＣＮ‰＝２/１０１２×１０００‰=1.98‰均值＝１．６６‰＋１．９８‰／２＝１．８２‰處理組

１、ＭＣＮ‰=５／１３５３×１０００‰＝３．７０‰２、ＭＣＮ‰＝６／１２４６×１０００‰＝４．８２‰均值＝３．７０‰＋４．８２‰／２＝４．２６‰

污染指數(shù)（ＰＩ）＝處理組ＭＣＮ‰平均值／對(duì)照組ＭＣＮ‰平均值處理組１

污染指數(shù)（ＰＩ）＝１．８２‰／１．８１‰＝１．０１

處理組２

污染指數(shù)（ＰＩ）＝４．２６/１．８１‰＝２．３５

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)論

處理組１ＰＩ在０－１．５之間，基本沒污染。處理組２ＰＩ處于２－３．５之間屬中污染。五、實(shí)驗(yàn)心得

１、對(duì)嚴(yán)重污染的水環(huán)境，監(jiān)測(cè)可能導(dǎo)致根尖死亡，應(yīng)先稀釋再做實(shí)驗(yàn)。

２、根尖催芽時(shí)，溫度應(yīng)保持于２５℃，否則會(huì)影響根尖正常生長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)二

監(jiān)測(cè)項(xiàng)目：總大腸大腸菌群的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)器材及試劑：瓶皿、移液管、試管、錐形瓶、恒溫箱、顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、電爐、采樣瓶、量杯、導(dǎo)管、酒精燈、接種環(huán)、無菌水、ＰＨ試紙。

鹽酸、氫氧化鈉溶液、結(jié)晶紫染液、革蘭氏碘液、番紅染液、９５％乙醇

一、實(shí)驗(yàn)步驟：１、１２月２７日

１）制作乳糖蛋白胨培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基２）包扎實(shí)驗(yàn)儀器并滅菌２、１２月２８日

１）在圭塘河的排污口上、中、下游采集水樣。２）對(duì)采集的水樣進(jìn)行稀釋３）進(jìn)行初步發(fā)酵３、１２月２９日

１）平板分離（將初發(fā)酵中產(chǎn)酸產(chǎn)氣及產(chǎn)酸發(fā)酵管接種于伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上，并平板分離。

２）將接種好的瓶皿置于３７攝氏度恒溫箱中培養(yǎng)１８－２４ｈ。４、１２月３０日

１）在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上選取符合特征的菌落。（深紫黑色。具有金屬光澤，紫黑色，不帶或略帶金屬光澤的菌落；淡紅色，中心色較深的菌落）

２）對(duì)選出的菌落進(jìn)行涂片，革蘭氏染色，鏡檢。

３）進(jìn)行復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)（將鏡檢菌落為革蘭氏陰性無芽孢的桿菌挑取一部分接種乳糖蛋白胨培養(yǎng)基，置于３７攝氏度恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)１８２４小時(shí)。５、１２月３１日

１）對(duì)進(jìn)行復(fù)發(fā)酵的試管進(jìn)行觀察，有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者及存在大腸菌群。２）根據(jù)證實(shí)有大腸菌群存在的陽(yáng)性管，并查大腸菌群數(shù)表，報(bào)告每升水樣中的大腸菌群數(shù)。二、實(shí)驗(yàn)結(jié)論

實(shí)驗(yàn)失敗，無實(shí)驗(yàn)結(jié)果。三、實(shí)驗(yàn)心得

１）實(shí)驗(yàn)之所以失敗，是因?yàn)槌醢l(fā)酵時(shí)時(shí)間不足，導(dǎo)致時(shí)間時(shí)間完全推遲。

２）加小導(dǎo)管時(shí)，應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。３）整個(gè)實(shí)驗(yàn)應(yīng)遵循無菌操作。

擴(kuò)展閱讀：周圍微生物檢測(cè)觀察實(shí)驗(yàn)報(bào)告

周圍微生物檢測(cè)觀察實(shí)驗(yàn)報(bào)告

汽車14班張建宇201*010780實(shí)驗(yàn)時(shí)間201*1年10月16號(hào)同組成員：馬躍陳浩

A實(shí)驗(yàn)原理：1.微生物的的分離與純化：從混雜的微生物群體中獲得只含某種或某一株微生物的過程。根據(jù)微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)，酸堿度，溫度和氧氣的要求條件不同，供給他適宜的培養(yǎng)，或者加入某些抑制劑造成抑制其生存的條件，從而淘汰其他細(xì)菌的生長(zhǎng)，再用稀釋涂布平板法或稀釋后平板劃線分離，純化該微生物，直至得到純的微生物。

2.平板菌落計(jì)數(shù)法是將待測(cè)樣品竟是當(dāng)d稀世之后。其中的微生物充分分散成單

個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個(gè)菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單一細(xì)胞。統(tǒng)一菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換輸出樣品中的的含菌數(shù)。

平板菌落計(jì)數(shù)法雖然操作較繁雜，結(jié)果需要培養(yǎng)一段時(shí)間才能取得，而且測(cè)定

結(jié)果已受多種因素的影響，但是，由于該計(jì)數(shù)方法的最大優(yōu)點(diǎn)是可以活的活菌的信息，所以被廣泛運(yùn)用于生物制品檢驗(yàn)（如活菌制劑），以及食品，飲料和水（包括水源）等的含菌指數(shù)或污染程度。

B實(shí)驗(yàn)材料：菌源:土樣10g牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基12個(gè)1000ul、200ul各一支培養(yǎng)箱

C實(shí)驗(yàn)試劑：生理鹽水,作100倍稀釋用0.9%無菌生理鹽水250ml三角瓶中裝99ml生理鹽水,每瓶加約20粒玻璃珠250ml三角瓶中99ml實(shí)驗(yàn)用具：平皿;涂棒;無菌200ul,1000ul吸頭;記號(hào)筆,酒精燈;

D實(shí)驗(yàn)步驟：1.采土樣:

選擇肥沃土壤,去表層土,挖5~20cm深度的土壤數(shù)10g,裝入燒杯,帶回實(shí)驗(yàn)室

2.制備土壤稀釋液;

稱取土樣1.0g，放入盛99ml無菌水并帶有玻璃珠的三角瓶中，用手振蕩5min使土壤均勻分散成為土壤懸液（10-2）。用1ml的無菌吸頭從中吸取1ml土壤懸液，注入事先分裝有99ml無菌水的試管中，吹吸3次，振蕩均勻（10-4）。

3.涂布

用一支的無菌吸頭，吸取10-4濃度土壤稀釋液100ul，較均勻地放入已寫好稀釋度的牛肉蛋白胨培養(yǎng)基平板上，用滅過菌的無菌玻璃涂棒涂勻。每個(gè)同學(xué)1個(gè)平板。

4．培養(yǎng)

將牛肉蛋白胨培養(yǎng)基平板倒置于350C溫箱中培養(yǎng)24h；統(tǒng)計(jì)所長(zhǎng)出的菌落數(shù)；

5.菌落計(jì)數(shù)

有較大片菌苔生長(zhǎng)時(shí),棄用,以無片菌苔生長(zhǎng)的平皿計(jì)數(shù);

若成片菌苔大小不到培養(yǎng)皿的一半,其余一半分布均勻,將此一半計(jì)數(shù)*2;6.菌落計(jì)數(shù)

土壤微生物含量=平板平均菌落數(shù)x105

E實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

估計(jì)有50-60個(gè)

這是用牙垢畫的線長(zhǎng)出的菌落，初步

這是泥土中的細(xì)菌長(zhǎng)成的菌落，雖然堆積混亂，但

是根據(jù)若成片菌苔大小不到培養(yǎng)皿的一半,其余一半分布均勻,將此一半計(jì)數(shù)*2的原則。可以數(shù)出大約有120-150個(gè)菌落，折合成土壤微生物含量在1.2-1.5*10^7

這是豆?jié){的菌落圖由于大量菌落堆積，無法數(shù)清具體數(shù)量。

這是敞口10min的圖片，我們可以清晰的看到10個(gè)菌落。

F實(shí)驗(yàn)討論：1.我的土壤實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)了多個(gè)菌種，其中還有一個(gè)黃色的菌種且擴(kuò)散的很快，說明在某一個(gè)相同的生存壞境中，可以同時(shí)存在多個(gè)菌種，也表示了在這些菌種中，生在繁殖的快慢是不一樣的。

2.我的幾乎每一個(gè)平板的一圈都有明顯的污染雜菌，這給我們兩點(diǎn)啟示，其一就是在排除外菌干擾的時(shí)候要特別注意邊緣的清理，其二涂抹實(shí)驗(yàn)物的時(shí)候要涂抹均勻。3.注意一些極易導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)誤差的變量，如實(shí)驗(yàn)過程中同學(xué)與同學(xué)之間的交流應(yīng)該盡量避免正對(duì)培養(yǎng)皿，同時(shí)試驗(yàn)之前注意洗手（雖然實(shí)驗(yàn)中證明了即使洗手也不會(huì)對(duì)微生物的存在構(gòu)成影響）但是可以保證單一變量的穩(wěn)定，使每個(gè)同學(xué)之間的實(shí)驗(yàn)誤差降低到最低。

4.在放置培養(yǎng)皿的時(shí)候請(qǐng)注意正反面的正確位置，向上的方向注意要是有培養(yǎng)瓊脂的一面，這樣是為了水蒸氣不影響微生物的呼吸作用。

固定化酵母細(xì)胞發(fā)酵啤酒實(shí)驗(yàn)

A實(shí)驗(yàn)原理：1.將生物酶或細(xì)胞固定在一定的基質(zhì)上,從而提供酶或細(xì)胞的利用效率;

2.固定化技術(shù)生產(chǎn)啤酒固定化細(xì)胞能重復(fù)使用;發(fā)酵后菌體與發(fā)酵液易于分離;后處

理工藝簡(jiǎn)單,成本低;可連續(xù)發(fā)酵,過程自動(dòng)化3包埋法固定化技術(shù)的一種;將微生物細(xì)胞均勻的包埋在水不溶性載體的緊密結(jié)構(gòu)中,細(xì)胞不易漏出;制定固定化細(xì)胞時(shí),細(xì)胞和載體不起任何反應(yīng),細(xì)胞處于最佳生理狀態(tài);固定化細(xì)胞有載體為屏障,可避免外界不利因素的影響。

B實(shí)驗(yàn)儀器材料和用具：啤酒酵母，100ml麥芽汁(8%~10%)/250ml三角瓶，2.5%海藻酸鈉溶

液5ml,滅菌;1.5%CaCl250ml,滅菌;0.9%無菌生理鹽水,50ml；無菌滴管;無菌玻璃棒;無菌封口膜封好的100ml三角瓶。

C實(shí)驗(yàn)步驟：1.菌體培養(yǎng)

將培養(yǎng)24h的新鮮斜面菌種,接種于三角瓶中培養(yǎng);

2.細(xì)胞固定化

在5mL海藻酸鈉溶液中,加入2ml預(yù)熱至35oC的酵母培養(yǎng)液,混合均勻,以無菌滴管吸取混合液,滴管口離液面5cm以上,緩慢而穩(wěn)定滴加到CaCl2溶液中,即可得到直徑約3mm左右的凝膠珠;全部滴入.鈣化30min;

3.在無菌玻璃棒幫助下倒掉CaCl2溶液,倒生理鹽水于制得的固定化好的酵母細(xì)

胞的瓶子中,洗一次凝膠珠,將100mL發(fā)酵培養(yǎng)基（麥芽汁）倒入制得的固定化小球的瓶子中,25℃靜止培養(yǎng)24小時(shí);放置4℃冰箱。4.品嘗啤酒。

D實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論：我們品嘗到了美味的啤酒，但是存在一個(gè)問題是麥芽糖液加的

比例過重導(dǎo)致了啤酒的口味極度偏甜，而且在配制海藻酸鈣溶液的時(shí)候沒有耐心的擠壓，導(dǎo)致了有一部分的顆粒狀物沒有充分的與液體接觸，這也可能是實(shí)驗(yàn)結(jié)果不太盡如人意的地方。

酸奶的制作

A實(shí)驗(yàn)原理：發(fā)酵過程在包裝容器中進(jìn)行，從而使成品因發(fā)酵而保持了凝乳的狀態(tài)。B實(shí)驗(yàn)材料和用具:袋裝巴氏消毒法處理過的牛奶（此處采用的是三元的牛奶），酸奶菌種。紙杯每人一個(gè)。

C實(shí)驗(yàn)步驟：1.取1000ml的鮮奶攪拌煮沸消毒加白糖60g攪拌溶解，趁熱干凈無菌的100ml的紙杯中，用潔凈的封口膜將杯口封住。冷卻至40度的時(shí)候?qū)⑹忻嫔系脑�味酸奶�?％的比例倒入融界好糖的牛奶中，攪拌均勻。2.在42度的條件下發(fā)酵培養(yǎng)6－8h的時(shí)間，此間牛奶不要?jiǎng)�，等待凝固成型的時(shí)候停止發(fā)酵。

3.將酸奶靜置于4攝氏度的冰箱中24h以上。

D實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論：在實(shí)驗(yàn)結(jié)束一天過后的，我們品嘗到了自己做的酸奶，酸奶的連稠度明顯高于市面上可以買到的酸奶并且口味更加的甜奶味更加的重。由此可以看出市面上的酸奶在原材料的選擇加工運(yùn)輸保存方面可能還存在一些漏洞。通過這樣一個(gè)簡(jiǎn)單實(shí)驗(yàn)，不僅僅給了我們知識(shí)和提高了我們的動(dòng)手能力，更重要的是，我們認(rèn)識(shí)到了一種理論學(xué)習(xí)與實(shí)踐的方法，那就是在掌握了一定的理論基礎(chǔ)上，我們有能力去進(jìn)行一些動(dòng)手操作的工作，這樣即對(duì)我們認(rèn)識(shí)知識(shí)理解知識(shí)有一定的幫助，同時(shí)也增加了學(xué)習(xí)的樂趣。其實(shí)生活中一些看起來比較復(fù)雜的事只是因?yàn)槲覀儧]有細(xì)心的去專研去開動(dòng)我們的腦筋，多問幾個(gè)為什么多動(dòng)手去做一些有興趣有意義的事，不僅豐富了我們的課余生活，更是一種積極向上的人生態(tài)度。

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