細(xì)胞生物學(xué)研究方法部分總結(jié)

合肥學(xué)院

201*屆《細(xì)胞生物學(xué)》階段性總結(jié)

題目第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法部分總結(jié)

姓名：崔俏俏專業(yè)：生物工程

班級：12級生物工程（1）班學(xué)號：120201*027指導(dǎo)教師：李老師

201*年10月22日

第三章細(xì)胞生物學(xué)研究方法

學(xué)習(xí)細(xì)胞生物學(xué)研究方法，了解實驗原理，掌握基本實驗方法，對于學(xué)習(xí)

細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)知識，加深對理論學(xué)說的理解，以及進(jìn)行創(chuàng)新性研究，推動本學(xué)科和相關(guān)學(xué)科的不斷發(fā)展都具有重要的意義。

細(xì)胞生物學(xué)的研究方法和實驗技術(shù)很多，根據(jù)研究方法的性質(zhì)、特點、應(yīng)用范疇和實驗技術(shù)原理、類型及條件的相關(guān)性和類同性，可以將其主要的研究方法和實驗技術(shù)分為以生物有機體組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)自然狀態(tài)為主體的形態(tài)學(xué)研究方法、細(xì)胞化學(xué)研究方法和模擬體內(nèi)環(huán)境、以實驗性設(shè)計為特色的綜合性研究方法和分子生物學(xué)技術(shù)等。

第一節(jié)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察方法

光學(xué)顯微技術(shù)

根據(jù)光學(xué)原理不同，目前光學(xué)顯微鏡已發(fā)展成多種類型，教學(xué)研究領(lǐng)域中常見的主要有以下幾種：

一．暗視野顯微鏡

暗視野顯微鏡又稱超顯微鏡或限外顯微鏡。它是根據(jù)“丁達(dá)爾效應(yīng)”光學(xué)原理，設(shè)計出來的一種特殊顯微鏡，比普通光學(xué)顯微鏡的分辨率高50倍。它通過暗視野聚光器，把直射光照明變?yōu)樾鄙涔庹彰�，使通過樣品進(jìn)入物鏡成像的光只有衍射光。所以，整個觀察視野背景是黑暗的，而觀察的樣品在黑暗的背景反襯下顯示出清晰的衍射光結(jié)構(gòu)輪廓。

二．相差顯微鏡

相差顯微鏡能夠把相差變成振幅差，主要依賴于它的特殊結(jié)構(gòu)。首先用環(huán)狀光闌代替可變光闌，環(huán)狀光闌是由大小不同的環(huán)狀孔形成的光闌，它們的直徑和孔寬是與不同的物鏡相匹配的，其作用是將直射光所成的像從一些衍射旁緣分出來。其次是用帶相板的相差物鏡代替普通物鏡，相板分為共軛區(qū)和補償區(qū)，可選擇性地鍍上吸收光線的吸收膜和推遲相位的相位膜，從而使相板具有既能推遲直射光線或衍射光的相位，又有吸收光調(diào)整亮度、突出疊加效果的作用。

三．熒光顯微鏡

熒光顯微鏡是能夠利用細(xì)胞內(nèi)某些化學(xué)成分或細(xì)胞經(jīng)特殊染色后，受到特定波長的光激發(fā)后，產(chǎn)生特征性波長的熒光，來檢測細(xì)胞內(nèi)某些化學(xué)組成的一種儀器。熒光顯微鏡是依靠一個高發(fā)光效率的點光源（高壓汞燈），釋放出含有較多數(shù)量的紫外光和藍(lán)紫光的復(fù)合光，經(jīng)過濾色系統(tǒng)后，形成激發(fā)光，激發(fā)標(biāo)本內(nèi)的熒光物質(zhì)發(fā)射出各種不同顏色的熒光后，再通過物鏡和目鏡（石英玻璃制成）的放大進(jìn)行觀察。

應(yīng)用熒光顯微鏡具有三個優(yōu)點：

敏感性高：只要細(xì)胞內(nèi)某種物質(zhì)的含量達(dá)到10-16克就能檢測出來。特異性強：特定性質(zhì)的化學(xué)物質(zhì)，在一定激發(fā)光的激發(fā)下，產(chǎn)生熒光的光譜性質(zhì)不變。

測定快速：細(xì)胞受激發(fā)后，就可進(jìn)行觀察，5-10分鐘即可獲得對細(xì)胞的特定物質(zhì)進(jìn)行定性、定位研究的結(jié)果。

第二節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞工程與顯微技術(shù)操作

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)

細(xì)胞培養(yǎng)是在無菌條件下，把動、植物組織細(xì)胞（微生物細(xì)胞），自有機體分離出來放在玻璃器皿內(nèi)，加入人工配制的培養(yǎng)基，使細(xì)胞繼續(xù)生存和生長，以直接觀察活細(xì)胞的形態(tài)、活動、分化及發(fā)育過程的一種技術(shù)。

細(xì)胞培養(yǎng)的突出特點是在離體的條件下觀察和研究細(xì)胞生命活動的規(guī)律。根據(jù)研究目的不同，可選用不同的培養(yǎng)方式。觀察細(xì)胞形態(tài)變化，可用蓋片微室懸滴培養(yǎng)、平板培養(yǎng)或液體懸浮培養(yǎng)，后用倒置相差顯微鏡進(jìn)行活體觀察；檢查細(xì)胞繁殖速度，用細(xì)胞懸浮培養(yǎng)為宜。

動物細(xì)胞一般接種于有培養(yǎng)液或半固體培養(yǎng)基的器皿中，于37℃，5％CO2，95％空氣，95％～100％濕度的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。植物細(xì)胞或原生質(zhì)體則采用固體、懸滴、液體等多種培養(yǎng)方法，溫度為25～30℃，有時需光照，對液體培養(yǎng)需通風(fēng)。

細(xì)胞的生長需要有充分營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基和適宜的環(huán)境條件。培養(yǎng)基不僅要具備正常機體中可以從外環(huán)境中攝取的必需氨基酸，還要提供一些非必需氨基酸、多種維生素，這是細(xì)胞代謝過程中必不可少的成分，而離體的動植物細(xì)胞、原生質(zhì)體自身不能合成；培養(yǎng)基中還需含Ca2+、Mg2+等無機離子與緩沖成分，以組成一定離子強度和穩(wěn)定pH（pH7.27.4）的細(xì)胞生長條件；還應(yīng)提供適量的葡萄糖，以維持細(xì)胞代謝及產(chǎn)能；動物細(xì)胞培養(yǎng)時，尚需加入適量的血清，而植物細(xì)胞及原生質(zhì)體培養(yǎng)時，需加入生長素、激動素等植物激素。

目前常見的細(xì)胞培養(yǎng)類型主要有：原核生物培養(yǎng)，，動物細(xì)胞培養(yǎng)和植物細(xì)胞培養(yǎng)。

一．原生物細(xì)胞培養(yǎng)

細(xì)菌細(xì)胞培養(yǎng)簡便，生長繁殖快，不僅能直接利用細(xì)菌本身進(jìn)行污水處理等工業(yè)化生產(chǎn)，而且目前的生物工程技術(shù)中，利用細(xì)菌表達(dá)一些人工構(gòu)建的基因產(chǎn)物也成了現(xiàn)實，細(xì)菌細(xì)胞在基因工程研究中發(fā)揮著越來越重大的作用。細(xì)菌的培養(yǎng)關(guān)鍵是防止其它菌的污染，它可在液體培養(yǎng)基中生長也可在固體培養(yǎng)基上生長。

二．動物細(xì)胞培養(yǎng)

體外培養(yǎng)的動物細(xì)胞可分為原代細(xì)胞與傳代細(xì)胞。原代細(xì)胞是指從機體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。有人把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。適應(yīng)在體外培養(yǎng)條件下持續(xù)傳代培養(yǎng)的細(xì)胞稱為傳代細(xì)胞。

三．植物細(xì)胞培養(yǎng)

植物細(xì)胞培養(yǎng)主要有單倍體細(xì)胞培養(yǎng)和原生質(zhì)體培養(yǎng)。單倍體細(xì)胞培養(yǎng)主要用花藥在人工培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)�？梢詮男℃咦樱ㄐ坌陨�殖細(xì)胞）直接發(fā)育成胚狀體，然后長成單倍體植株；或者通過愈傷組織誘導(dǎo)分化出芽和根，最終長成植株。單倍體細(xì)胞培養(yǎng)已在植物育種中取得了很大成就。

總結(jié)：

對本章部分內(nèi)容做過總結(jié)以后，更有利于我對其知識點

的掌握，對我以后的學(xué)習(xí)也有很大的幫助。因此，也希望自己在以后的學(xué)習(xí)過程中能養(yǎng)成一種善于總結(jié)的良好習(xí)慣。

擴展閱讀：4細(xì)胞生物學(xué)研究方法答案

第二章細(xì)胞生物學(xué)研究方法

一、名詞解釋

1、resolution：分辨力是指顯微鏡或人眼在25cm的明視距離處，能清楚地分辨被檢物體細(xì)微結(jié)構(gòu)最小距離的能力。能夠區(qū)分的兩點間的距離越小，表示分辨力越高。

2、顯微結(jié)構(gòu)：通過光學(xué)顯微鏡所觀察到的樣品的各種結(jié)構(gòu)，如細(xì)胞的大小、外部形態(tài)以及細(xì)胞核、線粒體、高爾基復(fù)合體、中心體等內(nèi)部構(gòu)成都屬于顯微結(jié)構(gòu)。

3、超微結(jié)構(gòu)：也稱亞顯微結(jié)構(gòu)。指在電子顯微鏡下所觀察到的細(xì)胞結(jié)構(gòu)，如細(xì)胞核、線粒體、高爾基復(fù)合體、中心體、核糖體、微管、微絲等細(xì)胞器的微細(xì)結(jié)構(gòu)。

4、細(xì)胞培養(yǎng)：指活細(xì)胞在體外的培養(yǎng)技術(shù)，即在無菌條件下，從機體中取出組織或細(xì)胞、模擬機體內(nèi)正常生理狀態(tài)下生存的基本條件，讓它在培養(yǎng)皿中繼續(xù)生存、生長和繁殖的方法。

5、原代培養(yǎng)：指從機體組織中取材后接種到培養(yǎng)基中所進(jìn)行的細(xì)胞培養(yǎng)，即直接取材于機體的細(xì)胞培養(yǎng)。所形成的細(xì)胞稱原代細(xì)胞，它是在體外培養(yǎng)任何一種體細(xì)胞所必須經(jīng)歷的階段和傳代培養(yǎng)的基礎(chǔ)。

6、傳代培養(yǎng)：指當(dāng)原代培養(yǎng)的細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中生長、增殖到一定密度后，一分為二或以其他比例分裝或轉(zhuǎn)移到2個以上的培養(yǎng)瓶中所進(jìn)行的再培養(yǎng)。

7、細(xì)胞融合：又稱為細(xì)胞雜交，指細(xì)胞彼此接觸時，2個或2個以上的細(xì)胞合并成為一個細(xì)胞的現(xiàn)象。8、cellline：原代培養(yǎng)首次傳代成功后，則稱之為細(xì)胞系。如細(xì)胞系的生存期有限，則稱之為有限細(xì)胞系；已獲無限繁殖能力，能持續(xù)生存的細(xì)胞系，則稱為連續(xù)細(xì)胞系或無限細(xì)胞系。二、選擇題【A1型題】

1、A；2、B；3、B；4、A；5、C；6、D；7、A；8、D；9、C；10、D；11、C；12、A；13、A；14、B；15、C；16、A；17、E；18、A；19、C；20、D；21、C；22、E；23、A；24、D；25、B；26、E【A2型題】

1、E；2、D；3、C；4、D；5、A；6、B；7、C；8、D；9、D；10、A【X型題】

1、ACE；2、CDE；3、AE；4、CE；5、ABCD；6、ABC；7、ABCED；8、ACD；9、ABCD三、填空題

1、普通顯微鏡相差顯微鏡暗視野顯微鏡熒光顯微鏡2、照明系統(tǒng)光學(xué)放大系統(tǒng)機械裝置系統(tǒng)

3、電子照明系統(tǒng)電磁透鏡成像系統(tǒng)真空系統(tǒng)記錄系統(tǒng)電源系統(tǒng)4、物鏡和照明系統(tǒng)的位置顛倒

5、掃描電子顯微鏡透射電子顯微鏡6、0.1μm0.1mm3nm

7、差速離心法密度梯度離心法

8、0.2μmR=0.61λ／N.A.N.A.=nsinα／2

9、細(xì)胞化學(xué)法熒光細(xì)胞化學(xué)和免疫熒光鏡檢術(shù)放射自顯影技術(shù)細(xì)胞顯微分光光度測定技術(shù)流式細(xì)胞計量術(shù)細(xì)胞組分的分級分離法10、冰凍蝕刻

11、原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)

12、單層生長形態(tài)變成多態(tài)性具有接觸抑制現(xiàn)象13、體外環(huán)境不能與體內(nèi)的條件完全等同四、判斷題

1、√；2、×；3、√；4、×；5、√；6、×；7、√；8、√；9、√；10、×；11、√；12、×；13、×；14、×五、簡答題

1、光學(xué)顯微鏡上調(diào)節(jié)光線強弱的裝置有反光鏡、聚光鏡和光闌。

（1）反光鏡：反光鏡是安裝在鏡臺下面、鏡柱前方的面可轉(zhuǎn)動的圓鏡。用來調(diào)節(jié)光線，能將來自不同方向的光線收集起來反射到聚光鏡中。

（2）聚光鏡：聚光鏡是位于鏡臺下方的組透鏡，用以匯集光線使其成束，增強照明度和視野的亮度。

（3）光闌：光闌是位于聚光鏡底部的一個圓環(huán)狀結(jié)構(gòu)，裝有多片半月形的薄金屬片，疊合在中央形成弧形孔。圓環(huán)外源的突起小柄可調(diào)節(jié)金屬片的分開或合攏，作用是調(diào)節(jié)光線強弱，使物像變得清晰。2、電鏡和光鏡從光源、透鏡、成像和分辨力四方面不同。

（1）光源的不同：光學(xué)顯微鏡利用可見光作為光源，照明部分包括反光鏡、聚光鏡和光闌，可對入射光線進(jìn)行集光并調(diào)節(jié)其強弱。電鏡是以電子束代替光源，以一根鎢絲作為陰極發(fā)射電子，電子受到陽極吸引而加快速度，加速的電子通過陽極的微孔形成電子束，構(gòu)成照明源。

（2）透鏡的不同：光學(xué)顯微鏡的透鏡由物鏡、目鏡組成，每種鏡頭由2～3個玻璃透鏡構(gòu)成，由于可見光能在空氣中直線前進(jìn)，所以玻璃透鏡可直接在空氣中工作。電子顯微鏡使用產(chǎn)生軸對稱磁場的精密線圈作為電磁透鏡，以電磁場透鏡代替玻璃透鏡，但因為電子撞擊空氣分子將發(fā)生散射而不能直線前進(jìn)，所以，鏡筒中的空氣必須抽出，保持高度真空。

（3）成像的不同：光學(xué)顯微鏡是通過物鏡和目鏡的組玻璃透鏡將標(biāo)本上的微小物體放大成像。在電子顯微鏡下，標(biāo)本通過一個氣閘送入真空鏡筒，經(jīng)聚光鏡匯聚的平行電子束被物鏡、中間鏡和投影鏡多級放大，最后在熒光屏上成像即時觀察，或投射到照相底片上成像使底片感光作為永久記錄。（4）分辨力不同：光學(xué)顯微鏡分辨力可達(dá)200nm（油鏡），電子顯微鏡分辨力為0.1nm。

3、如果含有很多的其他分子，會與電子發(fā)生碰撞，使電子散射，引起眩光，影響成像質(zhì)量；碰撞也會使電子束不穩(wěn)定，產(chǎn)生閃爍現(xiàn)象；灼熱的燈絲遇氣體也易腐蝕和斷裂。

4、因為電鏡是電子成像。肉眼無法觀察帶有“樣品信息”的電子束。所以要有記錄系統(tǒng)來記錄成像結(jié)果。5、照明方式通常為落射式，即光源通過物鏡投射于樣品上；光源為紫外光，波長較短，分辨力高于普通顯微鏡；有兩個特殊的濾光片，光源前的用以濾除可見光，目鏡和物鏡之間的用于濾除紫外線，用以保護(hù)人的眼睛。

6、冰凍蝕刻技術(shù)亦稱冰凍斷裂。標(biāo)本置于干冰或液氮中，進(jìn)行冰凍。然后用冷刀驟然將標(biāo)本斷開，升溫后，冰在真空條件下迅即升華，暴露出了斷裂面的結(jié)構(gòu)。冰升華暴露出標(biāo)本內(nèi)部結(jié)構(gòu)的步驟稱為蝕刻。蝕刻后，再向斷裂面上噴涂一層蒸氣碳和鉑。然后將組織溶掉，把金屬薄膜剝下來，此膜即為復(fù)膜。復(fù)膜顯示出了標(biāo)本蝕刻畫的形態(tài)，可置于電鏡下觀察。電鏡下的影像即代表標(biāo)本中細(xì)胞斷裂面處的結(jié)構(gòu)。

7、高等生物是由多細(xì)胞構(gòu)成的整體，在整體條件下要研究單個細(xì)胞或某一群細(xì)胞在體內(nèi)的功能活動是十分困難的。但是如果把活細(xì)胞拿到體外培養(yǎng)進(jìn)行觀察和研究，則要方便得多，培養(yǎng)中的細(xì)胞不受體內(nèi)復(fù)雜環(huán)境的影響，人為改變培養(yǎng)條件（如物理、化學(xué)、生物等外界因素的變化）即可進(jìn)一步觀察細(xì)胞在單因素或多因素影響下的生理功能變化�；罴�(xì)胞離體后要在一定的生理條件下才能存活和進(jìn)行生理活動，特別是高等動植物細(xì)胞要求的生存條件極其嚴(yán)格，稍有不適就要死亡。所以，細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)就是選用最佳生存條件對活細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)和研究的最基本技術(shù)之一。

8、體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的一般過程是：①準(zhǔn)備工作，包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試。②取材：在無菌環(huán)境／從機體取出某種組織細(xì)胞，經(jīng)過一定的處理（如消化分散細(xì)胞、分離等）后接人培養(yǎng)器血中，這一過程稱為取材。如果是細(xì)胞株的擴大培養(yǎng)，則無取材這一過程。③培養(yǎng)：將取得的組織細(xì)胞接人培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng)。如進(jìn)行組織塊培養(yǎng)，則直接將組織塊接入培養(yǎng)器皿底部，幾個小時后組織塊可貼牢在底部，再加入培養(yǎng)基。如進(jìn)行分散細(xì)胞的培養(yǎng)，一般應(yīng)在接種于培養(yǎng)器皿之前進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，按要求以一定的量（以每毫升細(xì)胞數(shù)表示）接種于培養(yǎng)器皿并直接加入培養(yǎng)基。細(xì)胞種于培養(yǎng)器皿后，立即放入培養(yǎng)箱中，使細(xì)胞盡早進(jìn)入生長狀態(tài)。9、體外培養(yǎng)細(xì)胞必須注意三個環(huán)節(jié)：物質(zhì)營養(yǎng)、生存環(huán)境和廢物的排除。

體外培養(yǎng)細(xì)胞所需的營養(yǎng)是由培養(yǎng)基提供的。培養(yǎng)基通常含有細(xì)胞生長所需的氨基酸、維生素和微量元素。一般培養(yǎng)細(xì)胞所用的培養(yǎng)基是合成培養(yǎng)基，它含有細(xì)胞生長必需的營養(yǎng)成分：但是在使用合成培養(yǎng)基時需要添加一些天然成分，其中最重要的是血清，以牛血清為主。這是因為血清中含有多種促細(xì)胞生長因子和一些生物活性物質(zhì)。

由于血清中含有一些不明成分，對于特殊目的細(xì)胞培養(yǎng)是不利的。為此，研究人員正在探索無血清培養(yǎng)細(xì)胞的條件，并已經(jīng)取得一些進(jìn)展。由于機體內(nèi)的細(xì)胞生長通常需要不同的細(xì)胞因子進(jìn)行調(diào)節(jié)，所以，在無血清培養(yǎng)時仍然需要添加必要的因子，包括促細(xì)胞生長因子（如EGF），促貼附物（如層黏連蛋白）和其他活性物質(zhì)（如轉(zhuǎn)鐵蛋白）。無血清培養(yǎng)排除了有血清培養(yǎng)時血清中不明因素的干擾，使實驗結(jié)果更加可靠。

體外細(xì)胞培養(yǎng)必須模擬體內(nèi)細(xì)胞生長的環(huán)境。環(huán)境因素主要是指無菌環(huán)境、合適的溫度、一定的滲透壓和氣體環(huán)境。氣體主要有兩種，即O2和CO2。后者對于維持細(xì)胞培養(yǎng)液的酸堿度十分重要。

活體內(nèi)生長的細(xì)胞所產(chǎn)生的代謝物和廢物通過一定的系統(tǒng)進(jìn)行利用和排除。體外培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生的代謝物和廢物積累在培養(yǎng)液中，所以定期更換培養(yǎng)液，對于體外細(xì)胞培養(yǎng)也是至關(guān)重要的。六、問答題

1、分辨力表示的是能夠區(qū)別兩個點間最近距離的能力，所以廣值越小，分辨力越高。從分辨力的表達(dá)式來看，NA越大，分辨力越高，或者波長越短，分辨力越高。

當(dāng)以可見光作光源，玻璃透鏡的最大分辨力是多少呢？應(yīng)從以下幾個方面來考慮這一問題。首先應(yīng)如何盡可能地縮短波長�？梢姽獾牟ㄩL范圍是400～700nm，而可見光中的藍(lán)色光波長最短，為450nm，所以光鏡使用時應(yīng)濾去其他雜色光。第二是使NA的數(shù)值盡可能大，因為最好的玻璃透鏡的鏡口角是70°，所以sinα的最大值為0.94，空氣的折光率（n）為1，因此玻璃透鏡的最大數(shù)值孔徑為0.94。這樣，我們可以計算光鏡的最大分辨力了：假定用最好的玻璃透鏡，角孔徑為70°，用最短的可見光藍(lán)色光的波長為450nm，用空氣作為光的折射介質(zhì)，則最大分辨力為R=0.61λ／N.A.=0.61×450／0.94=292nm。

光鏡中的油鏡可用油作為光折射的介質(zhì)，由于油的折光率為1.5，所以用油鏡時，分辨力R=0.61λ／N.A.=0.61×450／1.5×0.94=196nm=0.2μm

在光學(xué)顯微鏡中，用紫外光作光源可使分辨率提高到0.1μm。紫外光的波長較短，約為200～300nm。但是，紫外光是肉眼不可見的，必須通過照相。另外，用紫外光源時需用石英透鏡，價格較高。

2、基本原理：動物高度分化的細(xì)胞核具有全套的個體遺傳信息，保持著全能性，有發(fā)育為完整個體的潛在能力。

基本步驟：

（1）取出一只成年母羊的乳腺上皮細(xì)胞，在低血清濃度下進(jìn)行體外培養(yǎng)。（2）取出卵細(xì)胞供體母羊的卵母細(xì)胞進(jìn)行去核處理。

（3）利用電融合技術(shù)使乳腺上皮細(xì)胞與去核卵母細(xì)胞進(jìn)行電融合。（4）將融合細(xì)胞在體外培養(yǎng)至囊胚期。

（5）將囊胚移植到母羊的子宮內(nèi)，使其著床和發(fā)育，直至生出小羊。主要技術(shù)：細(xì)胞培養(yǎng)；細(xì)胞融合；胚胎培養(yǎng)和胚胎移植。

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